电针刺足三里穴对脓毒症大鼠心脏损害机制的研究

Effect of electro-acupuncture at Zusanli point on the injury of the heart function in sepsis rats

目的探讨电针足三里穴对脓毒症大鼠心脏功能和结构的影响及机制。方法将24只SD成年大鼠随机分为假手术组＋电针非经非穴组（N＋SEA），假手术＋电针足三里组（N＋EA），脓毒症＋电针足三里组（CLP＋EA），脓毒症＋电针非经非穴组（CLP＋SEA），共4组（n=6）。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）法制备大鼠脓毒症模型。N＋EA组和CLP＋EA组电针足三里穴，N＋SEA组和CLP＋SEA组电针非经非穴。6h后，摘除心脏固定于Langendorff灌流装置；置入左心导管，测定大鼠心脏左室舒张末压（LVEDP）、左心室收缩末期压力（LVSP），左室压最大上升速率（dp／dtmax）、心脏输出量（co）和心率（HR）。最后取心脏组织行免疫组织化学和实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）检测基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9及金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP）-1、TINP-2的表达。结果CLP＋SEA组LVEDP[（5．2±0．9）mmHg（1mmHg=0．133kPa）]、LVSP[（95．2±9．3）mmHg]，ap／dtmax[（1804±122）mmHg／s]、CO[（26．6±4．O）ml／min]和HR[（237±15）bpm]，均较N＋SEA组LVEDP[（9．9±1．6）mimHg]、LVSP[（127．8±8．7）mmHg]，ap／dtmax[（2484±98）mmHg／s]、CO[（43．10±5．30）ml／min]和HR[（310±12）bpm]，N＋EA组LVEDP[（9．6±1．7）thinHg]、LVSP[（128．3±9．9）mmHg]，dp／dtmax[（2536±107）nllnHg／s]、CO（45．9±5．7）ml／min和HR（312±15）bpm，明显降低（P〈0．01），而CLP＋EA组LVEDP[（7．9±0．9）mmHg]、LVSP[（112．0±11．9）mmHg]，dp／dtmax[（2270±152）mm Hg／s]、CO[（35．6±5．1）ml／min]和HR[（280±24）bpm]，较CLP＋SEA组明显改善（P〈0．01），在免疫组织化学检测中可见CLP＋SEA组MNP-2、NNP-9及TINP-1、TIMP-2的表达明显增强，而CLP＋EA组MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2的表达则在一定程度上减弱。在mRNA水平上，CLP＋SEA组MMP-2（1．47±0．06）、MMP-9（1．59±0．04）、TIMP-2（1．21±0．03）、TIMP-1（1．24±0．04）的mRNA表达明显增加（P〈0．01），而CLP＋EA组中MMP-2（1．30±0．09）、MMP-9（1．38±0．05）、TIMP-2（1．35±0．07）、TIMP-1（1．42±0．07）的表达较CLP＋SEA组均有不同程度的下降（P〈0．05）。结论电针刺足三里可减轻脓毒症大鼠心肌受损，改善血流动力学指标，其机制可能是电针刺足三里穴抑制了NMP-2和NMP-9的表达，改善两者与其特异性抑制剂表达的失衡，并同时激活了胆碱能抗炎通路。

Objective To discuss the effect of electro-acupuncturing at Zusanli point of the heart function and the structure of the rats with sepsis and the mechanism. Methods Twenty-four SD rats were randomly into four groups ： N ＋ SEA group, N ＋ EA group, CI..P ＋ EA group, CLP ＋ SEA group （ n = 6 each）. The cecum ligation perforation technique （CLP） was used to prepare rat model of sepsis. In N ＋ EA group and CLP ＋ EA group, the rats were given electroacupuncture Zusanli point. In N ＋ SEA group and CLP ＋ SEA group the rats were given electroacupuncture at the point far from the Zusanli point. After 6 h the heart were quickly removed and fixed in Langendorff perfusion device. The left cardiac catheterization from pulmonary vein was done, and the left ventricular end-diastolic pressure （LVEDP）, left ventricular end sys- tolic pressure （LVSP）, left ventricular pressure maximum rising rate （dp/dt max）, cardiac output （CO）and heart rate （HR） were determined. The heart tissue was taken for detection of the expression of matrix metalloproteinase （MMP） -2, MMP-9 and tissue inhibitor of metaJloproteinase （TIMP） -1, TIMP-2 by u- sing immunohistochemical staining and real time quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）. Results In CLP ＋ SEA group, LVEDP [ （5.2 ±0. 9） mm Hg （ 1 mm Hg =0. 133 kPa） ], LVSP [ （95. 2± 9.3） mm Hg], dp/dt max [（1804±122） mm Hg/s], CO [（26.6±4.0） ml/min] and HR [（237 ± 15）/mini were decreased obviously as compared with N ＋EA group [ LVEDP （9. 9±1.6） mm Hg, LVSP （127. 8 ±8.7） mm Hg, dp/dt max （2484 ±98） mm Hg/s, CO （43. 1 ± 5. 30） ml/min and HR （310 ± 12）/min] and N ＋ EA group [ LVEDP （9.6±1.7） mm Hg, LVSP （ 128.3± 9. 9） mm Hg, dp/dt max （2536±107） mmHg/s, CO （45.9±5.7） ml/minand HR （312±15）/min] （P〈0.01 for all）. As compared with CLP ＋ SEA group, LVEDP [ （7.9 ±0. 9） mm Hg], LVSP [ （ 112. 0 ±11.9） mm Hg], dp/dt max [ （2270 ± 152） mm Hg/s], CO I （35.6 ±5.1 ） ml/min], HR [ （280 ±24）/mini in CLP ＋ EA gourp were increased obviously （P 〈0. 01 ）. In CLP ＋ SEA group, the expression of MMP-2, MMP-9, TIMP-1 and TIMP-2 was strengthened obviously, while that was weakened in CLP ＋ SEA group. The mRNA expression of MMP-2 （ 1.47±0. 06）, MMP-9 （ 1.59 ± 0. 04）, TIMP-2 （ 1.21 ± 0. 03 ） and TIMP-1 （ 1.24± 0. 04） was increased in CLP ＋ SEA group, while that of MMP-2 （ 1.30 ± 0. 09 ）, MMP-9 （ 1.38 ±0. 05 ）, TIMP-2 （ 1.35 ±0. 07） and TIMP-1 （ 1.42± 0. 07 ） in CLP ＋ EA group was reduced to varying degrees （P 〈 0.05 ）. Conclusion Electro-aeupuneturing at Zusanli point can ease the injury of heart in rats with sepsis, improve the hemodynamies, which might be related to the fact that the electric acupunc- ture inhibits the expression of MMP-2 and MMP-9, improving the imbalance of them to their specific inhibi- tots, and at the same time activating the cholinergic anti-inflammatory pathway.