荧光蛋白Venus载体构建及在哺乳动物细胞中的表达

目的构建黄色荧光蛋白Venus重组载体,并观察其在哺乳动物细胞中表达情况。方法将Venus克隆至限制性内切酶处理的pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro载体上,转染293T细胞,荧光显微镜下观察结果。48 h后收集细胞蛋白,应用Western blot技术印证荧光蛋白Venus表达情况。结果重组载体经限制性内切酶鉴定及测序比对正确,转染293T细胞后可见明亮荧光,弥漫分布于细胞质中,Western blot证明荧光蛋白Venus高量表达。结论成功构建了Venus重组载体,荧光蛋白Venus在哺乳动物细胞中高表达,此为分子与细胞生物学提供了一种重要的研究工具。