双歧杆菌感受态细胞的制备和电转化条件的研究

Preparation of electrotransformation competent cells of Bifidobacterium and condition of electrotransformation

介绍目前常用的双歧杆菌感受态细胞制备方法，并系统研究影响双歧杆菌电转化效率的关键因素。通过研究，菌体在4oo为0.3-0. 5时收集以制备感受态细胞，制备好的感受态细胞应尽早用于电转化;最佳电场强度为12.5 kV/cm;转化后的细胞复苏培养2 h为佳。感受态细胞的转化效率可达103 CFU/μg DNA。

The aim of this study was to recommend the preparation of Bifidobacterium electrotrans formation competent cells. In thepresent work, some factors involved in preparation were systematically investigated to improve the transformation efficiency of the compe-tent cells. The optimum conditions were as follows ; collection of the cells at A600 of 0. 3 -0.5,the competent cells should be used as earlyas possible, electrotransformation at 12. 5 kV/cm, and posttransformation culture for 2 h. The transformation efficiency could reach 103CFU/μg DNA. 【Key words】 Bifidobacterium; Electrotransformation; Competent cells; Transformation efficiency双歧杆菌（Bifidobacterium）是人类和某些哺乳动物肠道中最重要的益生菌之一,具有广泛的生理作用,对人体健康起重要作用,以双歧杆菌为主要成分的微生态制剂已在临床广泛应用.双歧杆菌是一类革兰氏阳性专性厌氧菌,细胞壁主要由肽聚糖和脂磷壁酸、细胞壁蛋白质等组成,胞壁较厚,导致了双歧杆菌的基因操作较其他细菌困难,极大限制了进一步开发应用.上世纪90年代初,Missich等首先报告成功构建了大肠埃希菌_双歧杆菌的穿梭载体,实现了长双歧杆菌的电转化.此后,诸多的研究者分别尝试改进了双歧杆菌的电击转化条件,使得电转化率得到了很大的提高.但是由于穿梭质粒载体种类、大小不【收稿日期】2013^09 〉09[基金项目】广东省自然基金资助课题（05009077;8151802001000004 ; 10151802001000002）;深圳市科技计划重点项目（201201013）【作者简介】荀安营（1980-）,男,医学硕士,从事肠道微生态学的研究,Email：anyingrenl989@ 163. com;王立生,通讯作者,医学博士,博士生导师,Email ： wanglsl68@163. com同,受体菌种类、生长阶段等诸多因素的不确定性,其电转化条件差异较大.本研究首先介绍目前常用的双歧杆菌感受态细胞制备方法.然后对细菌的生长阶段、电场强度、感受态细胞保存时间、转化后复苏时间等几个影响转化率的因素进行探讨.