应用ELISA测定重组细胞因子中残余大肠杆菌菌体蛋白含量

目的建立灵敏度高，重复性好的残余宿主菌Ｅ。ｃｏｌｉ菌体蛋白含量的测定方法。方法电泳显示 ５株大肠杆菌ＤＨ５２、ＪＭ１０３、ＪＭ１０５、Ｎ８４３０和ＨＢ１０１的蛋白质组分各不相同，但均可被免疫印迹显色，说明免抗 Ｅ．ｃｏｌｉ．Ｋ１２，Ｃ６００抗体包括了其主要菌体蛋白的抗体，因此，用ＥＬＩＳＡ检测相应的菌体蛋白含量。结果优化后的 ＥＬＩＳＡ对 ＤＫａ、ＪＭ１０３、ＪＭ１０５和 ＨＢ１０１检测灵敏度均达到 １０ ｎｇ／ｍｌ。用混合菌体蛋白作为 Ｅ．ｃｏｌｉ菌体蛋白通用标准， 其灵敏度达到７．８ｎｇ／ｍｌ，含量在７．８－２５０ｎｇ／ｍｌ范围内，一次方程（ｙ＝ａ＋ｂｘ）线性良好（ｒ＞０．９９０）；在７．８－１０００ｎｇ／ｍｌ 范围内，二次方程（ｙ＝ａ＋ｂｘ＋ｃｘ２）线性良好（ｒ＞０．９９０）。变异系数小于１４％（ｎ＝４）。应用该法对国内外重组产品 进行测定，发现不同厂家不同产品其菌体蛋白含量各不相同。 ８种细胞因子共 ５７批，菌体蛋白含量大于 １％的 ３ 批，占５．３％；大于０．１％的９批，占１５．８％；大于０．０１％的２８批占４９.１％。说明还有不少厂家其重组产品纯化工艺 有待进一步提高。结论本方法灵敏度高，重复性好，可用于重组产品?