儿茶素对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障功能的保护作用

Protective effect of epigallocatechin-3-gallate in the intestinal mucosal barrier injury of severe acute

目的 本实验研究儿茶素对重症急性胰腺炎模型大鼠肠黏膜屏障功能损伤的保护作用及其机制,从而为重症急性胰腺炎的临床防治提供新的药物及思路.方法 80只清洁级SD大鼠按随机数字表分为正常对照组（8只）、假手术组（24只）、重症急性胰腺炎模型组（24只）和儿茶素（EGCG,24只）组.正常对照组不做任何处理；假手术组在开腹后仅翻动胰腺后关腹；急性胰腺炎模型组采用逆行十二指肠胰胆管注射5％牛黄胆酸钠溶液制备重症急性胰腺炎大鼠模型；儿茶素组在模型制备成功后即刻经尾静脉注射30mg/kg的儿茶素单体成分EGCG.各组大鼠分别在建模成功后6h、12h、24 h采集血液、肠道标本；检测血浆二胺氧化酶（DAO）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量；采用免疫组织化学法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达水平.结果 ①急性胰腺炎模型组术后6h、12 h、24 h血浆DAO浓度分别[（4.23±0.51）μ/L、（5.13±0.32）μ/L、（7.83±0.76） μ/L]、血淀粉酶浓度[（3158.64±218.25） μ/L、4277.24±231.35） μ/L、5842.76±248.18） μ/L]均明显高于正常对照组[DAO：（2.32±0.48）μ/L;血淀粉酶：（2074.11±101.56） μ/L]、假手术组[DAO：（2.24±0.43） u/L、（2.27.53） μ/L、（2.33±0.41） μ/L;血淀粉酶（1885.27±103.89）μ/L、（1778.57±98.94）u/L、（1935.24±105.87） μ/L].儿茶素组血浆DAO[（3.59±0.57） μ/L、（3.98±0.67） μ/L、（6.44±0.71）μ/L]、血淀粉酶浓度[（2576.70±123.43） μ/L、（2783.77±155.53）μ/L、（2902.32±176.25）μ/L]高于正常对照组、假手术组,但低于模型组.②与正常对照组、假手术组相比较,模型组肠道MDA、NO水平3个时间点依次升高[MDA：（2.28±0.35） μmol/g、（3.02±0.41） μmol/g、（3.78±0.48） μmol/g; NO：（16.80±0.60） μmol/g、（18.23±0.78） μmol/g、（20.14±0.82） μmol/g];儿茶素组MDA：（1.67±0.14） μmol/g、（1.75±0.16） μ.mol/g、（1.84±0.22） μmol/g; NO：（9.09±0.31） μmol/g、（9.32±0.44）μmol/g、（10.15±0.52） μmol/g较急性胰腺炎模型组肠道MDA、NO水平均明显降低.③重症急性胰腺炎组肠道iNOS表达水平（1.86）均高于正常对照组（0.10）、假手术组（0.25）；儿茶素治疗组肠道iNOS表达水平（0.66）低于模型组,但高于正常对照组、假手术组（P＜0.05）.结论 儿茶素对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障功能损害具有保护作用,机制与抗氧化、清除氧自由基及下调iNOS表达有关.

Objective The study was designed to investigate the intestinal mucosa barrier function changes in rats with severe acute pancreatitis （SAP）,and the intervention effect of epigallocatechin-3-gallate（EGCG） injection and its mechanisms of protection on intestinal mucosa barrier function injury of SAP with the purpose of providing evidence for preventing and curing intestinal mucosa barrier function injury of SAP in clinical practice.Methods A total of 80 healthy male Sprauge-Dawley （SD） rats were randomly divided into a normal group （Normal）,a sham-operation group （Sham）,a SAP model group （Model）,and a EGCG treated group （EGCG）,with 24 rats （except 8 rats in the normal group） in each group.The latter three groups each had three subgroups at three time points：6,12,24hours.Rats with SAP were prepared with retrograde cholangiopancreatic duct infusion in 5% sodium taurocholate.The dynamic changes of the indexes of intestinal mucosa barrier function injury and Pancreas injury were observed at various time points in each group,including the levels of Plasma diamine oxidase （DAO） and serum amylase and malondialdehyde （MDA）,nitric oxide（NO）,inducible nitric oxide synthase（iNOS）in gut.Results 1.The levels of serum amylase [（3158.64 ± 218.25）μ/L,（4277.24 ± 231.35）μ/L,（5842.76 ± 248.18）μ/L] and plasma DAO concentration [（4.23 ± 0.51） μ/L,（5.13 ± 0.32）μ/L,（7.83 ± 0.76） μ/L] in the Model group were significantly higher at 6 h,12 h,24 h postoperation than the Normal group[serum amylase：（2074.11 ± 101.56）μ/L,DAO：（2.32 ± 0.48） μ/L] and Sham group [serum amylase：（1885.27 ± 103.89） μ/L,（1778.57 ± 98.94） μ/L,（1935.24 ± 105.87） μ/L].The levels of serum amylase [（2576.70 ± 123.43） μ/L,（2783.77 ± 155.53） μ/L,（2902.32 ±176.25） μ/L] and plasma DAO concentration （3.59 ± 0.57） μ/L,（3.98 ± 0.67） μ/L,（6.44 ± 0.71） μ/L in the EGCG group were lower than the Model group,but higher than the Normal group and the Sham group.Compared with the Normal group and the Sham group,the concentration of MDA and NO [MDA：（2.28±0.35） μmol/g,（3.02 ± 0.41） μmol/g,（3.78 ± 0.48） μmol/g ; NO：（16.80 ± 0.60） μmol/g,（18.23 ± 0.78） μmol/g,（20.14±0.82） μ,mol/g] significantly increased in the Model group at 6h,12 h,and 24 h postoperation.The concentration of MDA and NO （1.67±0.14） μmol/g,（1.75±0.16） μmol/g,（1.84±0.22） μmol/g; NO：（9.09±0.31） μmol/g,（9.32±0.44）μmol/g,（10.15±0.52）μmol/g were lower in the EGCG group in all times than the Model group.Compared with the Normal group （0.10） and the Sham group （0.25）.The expression ofiNOS was significantly increased in the Model group（1.86）.The expression of iNOS was lower in the EGCG group （0.66） in all times than the Model group,but higher than the Normal group and the sham group （P〈0.05）.Conclusion Conclusion EGCG can protect the damages of intestinal mucosa barrier function in SAP rats,probably through reducing free radicals,and the iNOS expression.