RyR1基因沉默对人肺癌细胞生物学活性的影响

目的：利用针对兰尼碱受体1（Ryanodinereceptor1，RyRl）的小干扰RNA（siRNA），研究沉默RyRl基因表达对人肺癌细胞株A549细胞生物学活性的影响。方法：（1）设计并合成针对RyRl基因的siRNA及阴性对照片段（不针对任何已知人的mRNA）和阳性对照片段（沉默GAPDH内参基因），转染肺癌细胞A549；（2）实时荧光定量一PCR（Real—timefluorogenticquanti—tativePCR，FQ-PCR）和蛋白质印迹（Westernblot）分别检测转染后RyRImRNA表达及RyRl蛋白表达的变化；（3）MTT实验检测转染前后细胞增殖能力的变化；（4）流式细胞术检测转染前后细胞周期及细胞凋亡的状态。结果：（1）FQ-PCR结果显示RyRlsiRNA-1969可下调RyRlmRNA的表达，相对表达量与阳性对照组和阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；（2）转染RyRlsiRNA后RyRl蛋白表达下调；（3）MTT实验显示RyRl表达沉然后的A549细胞生长缓慢，与对照组相比较差异有统计学意义（P〈0.05）；（4）转染后细胞凋亡率较空白对照组（正常培养的A549细胞）和阴性对照组（转染阴性对照小RNA片段的A549细胞株）显著增高（P〈0.001），处于G0~G1期的细胞明显增多（P〈0．001）。结论：RyR1基因可能为肺癌的基因治疗提供新策略。