整合素连接激酶对瘢痕成纤维细胞增殖和分化的影响

Study of the effects of integrin-linked kinase on proliferation and differentiation of fibroblast in hypertrophic scar

【摘要】目的观察整合素连接激酶（integrin—linkedkinase，ILK）对人瘢痕成纤维细胞增殖和分化的影响，以探讨其在瘢痕形成中的作用。方法体外分离培养瘢痕成纤维细胞，并按下述方法处理并分组：①空白对照组，仅含有常规高糖DMEM培养液；②转染试剂jetPRIME。TM对照组（jetPRIME。TM对照组），常规高糖DMEM培养液与200μljetPRIME。TMbuffer及4txljetPRIME。TM反应试剂；③ILK小分子干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA）组（ILKsiRNA组），常规高糖DMEM培养液与siRNA转染复合物；④ILK互补DNA（complementaryDNA，cDNA）组（ILKcDNA组），常规高糖DMEM培养液与cDNA转染复合物。分别检测细胞增殖、ILK信使RNA（messengerRNA，mRNA）、仅．平滑肌肌动蛋白（0I—smoothmuscleaetin，d—SMA）mRNA表达及其蛋白表达水平。结果①四唑翁盐（XTT）检测结果表明，转染后48h，各组成纤维细胞增殖水平，空白对照组为0．820±0．065，jetPRIMETM对照组为0．873±0．041，ILKsiRNA组为0．554±0．013，ILKcDNA组为1．296±0．094。各组48h内的细胞增殖曲线见，ILKsiRNA组的细胞增殖极为平缓，而ILKcDNA组的细胞增殖水平从12h开始逐渐升高。转染后48h，ILKsiRNA组细胞增殖水平明显低于其他3组（P值分别为0．021、0．034、0），ILKcDNA组细胞增殖水平明显高于其他3组（P值分别为0．017、0．009、0）。②实时荧光定量聚合酶链式反应（Real—timeqPCR）技术检测结果显示，ILKmRNA和OL．SMAmRNA的表达水平，空白对照组为0．6934-0．412和0．4224-0．037，jetPRIME“对照组为0．621±0．183和0．3884-0．005，ILKsiRNA组为0．0524-0．019和0．0734-0．023，ILKcDNA组为240．1934-35．170和138．056±24．060。ILKsiRNA组ILKmRNA和OL—SMAmRNA表达水平均显著低于其他组，差异有统计学意义（P〈0．05）；而ILKcDNA组ILKmRNA和d—SMAmRNA表达水平均显著高于其他3组，差异有统计学意义（P〈0．05）。③应用Westernblot检测发现ILKsiRNA组的ILK及d．SMA蛋白表达明显受到抑制，而ILKcDNA组的ILK及α一SMA蛋白表达均明显增加。结论ILK对成纤维细胞增殖具有促进作用，并能够在转录和翻译水平对n—SMA进行上调控制，可能通过促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化，并在瘢痕的形成与挛缩中起到重要作用。

Objective To study the role of integrin-linked kinase（ILK） on the proliferation and differentiation of human fibroblast in hypertrophic scar and its effect on the scar formation. Methods The human scar fibroblasts were isolated and cultured in vitro. The cells were divided into 4 groups.