分离自烧伤患者耐药弗氏柠檬酸杆菌的耐药基因分析

目的分析分离自烧伤患者的2株耐药弗氏柠檬酸杆菌的耐药基因，了解菌株对B内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类药物的耐药机制。方法笔者单位烧伤科分别于2012年6、8月收治1例分离出弗氏柠檬酸杆菌的大面积烧伤患者（每例患者分离1株菌），应用药敏卡AST-GNl3检测分离出的菌株对阿米卡星、氨苄西林、氨苄西林／舒巴坦、氨曲南、头孢唑林、头孢吡肟、头孢替坦、头孢他啶、头孢曲松、环丙沙星、厄他培南、庆大霉素、亚胺培南／西司他丁、左氧氟沙星等20种抗生素的敏感性；采用PCR法检测35种B内酰胺酶编码基因、15种氨基糖苷类修饰酶编码基因、6种16s核糖体RNA甲基化酶编码基因、2种氟喹诺酮类药物作用靶位编码基因和3种氟喹诺酮类药物作用靶位保护蛋白编码基因的表达，选取阳性表达基因进行DNA测序。结果2株弗氏柠檬酸杆菌对检测的13种B内酰胺类抗菌药物均耐药，对3种氨基糖苷类抗菌药物均耐药，对2种氟喹诺酮类抗菌药物耐药。1株弗氏柠檬酸杆菌对复方磺胺甲嗯唑耐药，2株弗氏柠檬酸杆菌均对呋喃妥因敏感。2株弗氏柠檬酸杆菌检出blaTEM、blaSHV和blaIMP3种p内酰胺酶编码基因，检出aac（3）-Ⅱ和ooc（6）-Ⅰb2种氨基糖苷类修饰酶编码基因，检出氟喹诺酮类药物作用靶位DNA回旋酶及拓扑异构酶编码基因gyrA、parC。经DNA测序分析，菌株在氟喹诺酮耐药决定区序列存在有义突变，gyrA编码基因第83位密码子由丝氨酸突变为异亮氨酸，parC编码基因第80位密码子由丝氨酸突变为异亮氨酸。结论2株弗氏柠檬酸杆菌检出blaTEM、blaTEM和blaIMP3种D内酰胺酶编码基因以及acc（3）-Ⅱ。aac（6）-Ⅰb氨基糖苷类修饰酶编码基因，可解释其对全部B内酰胺类（含碳青霉烯类）药物、氨基糖苷类药物耐药的机制。氟喹诺酮耐药决定区存在有义突变是该2株弗氏柠檬酸杆菌对氟喹诺酮类药物耐药的遗传学基础。