烟曲霉脱乙酰几丁质酶cDNA的克隆及其在大肠杆菌中表达的研究

将烟曲霉的一种胞外脱乙酰几丁质酶（AF CSN）纯化，并测定该酶N-端氨基酸的序列。用此序列推测的寡核苷酸引物扩增得到脱乙酰几丁质酶（csn）的cDNA，其全长为804bp，编码一种251个氨基酸的单肽，对csn的序列比较分析表明，它与茄病镰刀菌在两个区域具有同源性，这两个区域分别有重复天冬氨酸及苏氨酸残基，这说明它与细菌具有相同的演化起源。cns与已知的细菌脱乙酰几丁质酶没有同源性，Southern杂交分析显示，cns在烟曲霉基因组中的单拷贝的。用质粒栽体pET28a(t),csn cDNA被导入E.coli中得到csn的融合蛋白，在IPTG诱导下，E.coli细胞中可获得大量的约28kDa的成熟蛋白。