氧化硫硫杆菌质粒pTt12酶切图谱分析及其在E．coli中克隆

目的改造氧化硫硫杆菌的质粒pTt12，建立一个既能在氧化硫硫杆菌中复制又能在大肠杆菌中复制的穿梭质粒，为用基因工程改造在细菌浸矿、环境保护中使用的．T-业菌株提供实验根据。方法首先进行氧化硫硫杆菌（Thiobacillusthiooxidans-1）的pTt12质粒的限制性内切酶XhoⅠ、PvuⅡ、Bgl Ⅱ、HindⅢ、EcoRⅠ、PstⅠ、BamHⅠ和SalⅠ酶切分析，构建质粒pTt12的物理图谱。通过pBR325质粒（E．cold的SalⅠ切点和pTt12质粒的XhoI切点进行了体外重塑，构成了一个分子量为12．71Md的杂合质粒pSD125，并成功地转入了大肠杆菌HB101菌种。结论经分子量测定、酶切分析、转化试验证明，pSD125质粒确系pBR325和pTt12重组而成，且能在大肠杆菌HB101和Thiobacillusthlooxidans--1中转化克隆。