重组人粒/巨噬细胞集落刺激因子下游处理研究(Ⅱ)

目的 在成功构建人粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)高效表达克隆的基础上对其表达产物进行分离纯化,并对rhGM—CSF在溶液中的构象、稳定性、变复性等进行研究。方法 在纯化研究基础上利用傅里叶变换红外光谱技术(FTIR)对rhGM—CSF的构象进行研究,同时应用聚乙二醇(PEG)和牛肝二硫键异构酶(PDI)对GM—CSF的复性及体外折叠作用进行分析。结果 利用FTIR技术可见GM—CSF在D_2O溶液中20℃时含35％0α—螺旋,32％β—螺旋,11％转角和20％无规卷曲。适当PEG可使蛋白得率和比活性均达到最高,PDI可以提高蛋白质的正确折叠率。结论 采用FTIR研究蛋白质在溶液中的构象耗时短、重复性好、样品耗量小,对产品的质量控制及批间产品的稳定性具有指导价值。加入适当比例的PEG和PDI可使蛋白得率和比活性明显提高。