摘要
为了探讨利用黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）作为表达载体的可行性，克隆了山东株（ＳＤ）ＣＭＶ ＲＮＡ３的全长ｃＤＮＡ，并测定了全序列．采用定点突变的方法在衣壳蛋白（ＣＰ）基因起始密码子处改造出一个ＮｓｉＩ位点．以绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）基因置换ＳＤ－ＣＭＶＲＮＡ３ ｃＤＮＡ的ＣＰ基因．将Ｆｎｙ株ＣＭＶ ＲＮＡｌ，ＲＮＡ２和嵌合ＳＤ－ＣＭＶ ＲＮＡ３的ｃＤＮＡ分别克隆在３５Ｓ启动子和终止子之间构建成表达载体．在烟草原生质体中验证了该表达载体可以表达ＧＦＰ．然后将其接种到表达ＳＤ ＣＰ的转基因烟草上，试图构建成一个互补型载体．接种１０ｄ后，１８棵植株中，有５棵的接种叶和其中１棵的系统叶上可检测到表达的ＧＦＰ．然而１个月后，所有接种植株中都检测不到ＧＦＰ．通过ＲＴ－ＰＣＲ及序列分析，证实在互补系统中ＣＭＶ载体与ＣＰ转基因发生了重组．上述结果对这种ＣＭＶ互补型载体的可行性提出了质疑，同时也揭示了转ＣＭＶ ＣＰ基因抗病毒植物的生物安全性中存在的新的问题．
出处
《中国科学（C辑）》
CSCD
北大核心
2001年第2期97-105,共9页
Science in China(Series C)
基金
国家"863"计划资助项目!(批准号:101-04-02-01)
