高效液相排阻色谱技术在抗哇巴因多克隆抗体制备中的应用

Application of technology of HPSEC in preparation of anti-ouabain polyclonal antibody

目的 :探讨高效液相排阻色谱技术 ( HPSEC)在抗哇巴因多克隆抗体的制备及纯化中应用的意义。方法 :免疫新西兰大白兔制备出抗哇巴因多克隆抗体。在优化色谱条件下 ,应用 HPSEC技术纯化抗哇巴因多克隆抗体。采用酶联免疫吸附法 ( ELISA)及考马斯亮兰法进行定性、定量分析 ,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其纯度。分别选用三种标准蛋白。在优化的色谱条件下 ,分别测定标准蛋白的洗脱体积 ,并根据分子量的对数与洗脱体积绘制标准曲线。在相同的色谱条件下 ,测定抗哇巴因多克隆抗体的洗脱体积 ,从而测定分子量。结果 :优化的色谱条件为流动相 0 .0 5 mol/ L的磷酸盐缓冲液 ,p H6.0 ,流速 0 .30 ml/ min,进样量 5μl。纯化后抗体效价 1∶ 5 0 ,蛋白浓度 2 0μg/ ml。纯化后抗体电泳图谱仅可见一条色谱带。在优化的色谱条件下 ,测得抗哇巴因多克隆抗体的分子量为 166k D。结论 :HPSEC是一种有效、快速纯化抗哇巴因多克隆抗体的方法 ,为日后制备高纯度、高活性的抗哇巴因多克隆抗体奠定基础。同时 HPSEC也是测定分子量的有效方法。