银染单链构象多态性技术检测人IL-3基因突变

Detection of hIL-3 cDNA mutation with SS-SSCP technique

目的 对人白细胞介素 3(hIL 3)基因突变体进行分析和进一步鉴定 ,建立一种灵敏、快捷的检测基因突变和DNA多态性的方法 即银染单链构象多态性技术 (Singlestrandconformationpolymorphism ,SSCP)。方法 将野生型和突变型的人白介素 3(hIL 3)cDNA连接到PUC9和PUC19质粒载体上 ,转化入大肠杆菌 ,扩增质粒 ,用常规方法抽提 ,酶切 ,然后将酶切后的DNA片段进行PAGE胶电泳 ,银染检测野生型和突变型的异同。结果 以野生型hIL 3cDNA作为对照 ,连接到PUC9和PUC19上的电泳结果均为一致 ,突变型hIL 3cDNA的电泳带明显比野生型的电泳带靠后。结论 SSCP方法具有简便 ,快捷较灵敏的特点 ,对人白细胞介素 3(hIL 3)基因的点突变得到进一步的鉴定。