摘要
为开展肿瘤的复合基因治疗,构建以串联方式携带人野生型p53和B7-1基因的重组腺病毒穿梭质粒pXC53/B7-1。将pXC53/B7-1与腺病毒包装质粒GT4050共转染293细胞,通过细胞内同源重组获得重组腺病毒Ad-p53/B7-1。在293细胞中扩增病毒,并通过氯化铯密度梯度超速离心纯化病毒,获得高滴度和高纯度的病毒。分别经免疫组织化学分析和流式细胞分析检测Ad-p53/B7-1介导的人野生型p53和B7-1基因在喉癌细胞Hep-2中的表达。结果表明Ad-p53/B7-1能够有效地将其所携带的目的基因导入Hep-2细胞并使其在细胞中高效表达。
In orderto developa combinedgenetherapyparadigmfor thetreatmentof cancer,a recombinantadenoviral shuttleplasmidpXC53/B7-1containinghumanwild-typep53and B7-1geneswas constructedby molecularcloning.RecombinantadenoviruseAd-p53/B7-1was constructedby homologousrecombinationof pXC53/B7-1and adenoviral packagingplasmidGT4050in293cells.Adenoviruseswithhightiterandpuritywereobtainedby amplifyingin293cellson a largescaleandultra-centrifugatinginCsClstepgradientsolutions.Theexpressionsof p53and B7-1genesinhuman laryngealepithelialcarcinomacellsHep-2weredeterminedrespectivelyby immunohistochemicalassayandflowcytometric analysis.The resultsshowedthathumanwild-typep53and B7-1genescouldbe efficientlyexpressedin Hep-2cells mediatedby Ad-p53/B7-1.
出处
《生物技术通讯》
CAS
2002年第1期6-10,17,共6页
Letters in Biotechnology
基金
美国百特医疗用品公司资助~~
