摘要
运用定量分析方法对NADPH-d组化染色方法进行了初步探讨。实验对象采用在鼠海马,固定后的标本冰冻冠状连续切片35urn,切片染色封装后,光镜下图像分析方法定量观测染色效果。结果显示以下几个因素对染色的影响颇大。1.染液的配方:我们推荐NBT浓度为0.1mg/ml,NADPH-d浓度为1mg/ml,0.IMPBSpH7.3,Triton-100浓度为03%的配方。提高NBT浓度至0.2、04、0sing/ml,染色速度加快,但易造成深染细胞的过染而使神经元形态不清并易造成切片污染。NADPH—d的浓度最小值是ling/ml,较低的浓度05~08mg/ml染色速度减慢且着色浅淡,染色细胞数量减少。较高的浓度1.2、1.sing/ml与ling/ml的染色效果类似,但染色时间缩短。2.固定液:4%多聚甲醛固定的标本中,NADPH-d染色阳性神经元见于海马除锥体细胞层的其它各层,染色细胞为原生型NOS神经元,4%多聚甲醛+1.25%戊H醛固定的标本可使锥体细胞显示淡阳性,似可以使内皮型NOS神经元(eNOS)显示阳性。因此,选用不同固定液有助于确定NOS的类型。3.染色时间:37C下温育以40~60分钟为宜,时间过长可造成某些胶质细胞的染色并可使染色过深。通过试验我们认为:对脑组织进行NADPH-d染色的适宜条件为:NBT浓度:0.l一0.12ms/ml。
出处
《四川解剖学杂志》
1997年第1期57-58,共2页
Sichuan Journal of Anatomy