逆转录-半套式-聚合酶链反应单管法检测血清中HCV RNA

目的 探讨建立一种更简便 ,更特异灵敏的逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)单管法。方法 采用蜡隔将RT和PCR扩增 2个独立的反应体系在 1个Eppendoff(Ep)管中分隔开来 ,设计内外引物 ,优化反应体系及条件 ,使整个检测反应经高温启动继而连续封闭地完成。结果 在 6 0例血透析患者血清中 ,33例 (5 5 % )抗 HCV IgG阳性和 2 7例抗 HCV IgG阴性血清用单管RT PCR分别检出 2 8例 (85 % )和 3例 (9% )HCVRNA阳性 ,并对 3份阳性PCR产物作核酸序列测定。本方法的检测灵敏度为 10 2 拷贝 /ml。结论 RT PCR单管法在保持高灵敏度的前提下 ,提高了特异性 ,具有简单高效 。