钩吻素子抗大鼠神经病理性疼痛及对星形胶质细胞活化和自噬的作用

目的研究钩吻素子对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及其对脊髓星形胶质细胞介导的炎症反应及自噬的作用。方法大鼠坐骨神经压榨性损伤(CCI)模型上,以机械痛阈值(MWT)为指标,观察钩吻素子对CCI模型大鼠的镇痛作用;取大鼠脊髓组织,采用免疫组织化学结合荧光显微技术、ELISA和Western蛋白质印迹等方法,检测大鼠脊髓背角星形胶质细胞标记物(GFAP)及促炎细胞因子的表达水平,检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ,LC3-Ⅰ,P62和Beclin 1等表达水平,观察钩吻素子对CCI大鼠脊髓星形胶质细胞活化及自噬水平的影响;通过鞘内注射自噬抑制剂氯喹,观察其对钩吻素子的镇痛作用及星形胶质细胞活化水平的影响。结果钩吻素子7 mg·kg-1具有显著的抗CCI大鼠机械痛敏作用,并抑制脊髓背角星形胶质细胞GFAP的表达,同时减少促炎细胞因子TNF-α和IL-1β表达水平。CCI大鼠脊髓LC3-Ⅱ/Ⅰ比值及P62表达水平显著降低,提示神经病理性疼痛过程中自噬流受阻,钩吻素子可显著改善CCI大鼠脊髓自噬的抑制水平;免疫荧光双标法提示,钩吻素子促自噬作用较大程度发生于脊髓星形胶质细胞。鞘内注射氯喹可拮抗钩吻素子的镇痛作用及其对星形胶质细胞活化的抑制作用,提示钩吻素子镇痛作用可能与其促进脊髓自噬水平有关。结论钩吻素子抗神经病理性疼痛作用可能与其抑制脊髓背角星形胶质细胞活化并减少促炎细胞因子释放有关,也与其促进脊髓星形胶质细胞自噬水平有关。