SMMC—7721肝癌细胞层粘连蛋白受体的分离纯化

目的 分离纯化肝癌细胞的层粘连蛋白受体（LnR)，初步分析其糖链的结构和功能。方法 以SMMC－7721肝癌细胞和L－02正常肝细胞为材料，采用^131I标记的层粘连蛋白测定其与细胞的结合能力，亲和层析法分离纯化层粘连蛋白受体，用SDS－PAGE，放射显影及体外竞争结合实验进行鉴定；凝集素结合法分析糖链结构类型，内切糖苷酶水解层糖连蛋白受体的N－糖链后进行竞争结合实验，探讨N－糖链对层粘连蛋白与其受体结合的影响。结果 （1）相同条件下SMMC－7721肝癌细胞与层粘连蛋白特异结合量(ng/10^5细胞）为17．54±0．49，L－02正常细胞为8．36±0．48（P＜0．001）。（2）经过亲和层析，从SMMC－7721肝癌细胞和L－02正常肝细胞均可获得纯化受体，SDS－PAGE显示为单一条带，分子量为67kD，放射自显影及体外竞争结合实际 具有较强的与层粘连蛋白结合的活性。（3）通过体外竞争结合实验，SMMC－7721肝癌细胞层粘连蛋白受体（7721LnR)的抑制率可达到96．27±2．29％，而L－02正常肝细胞层粘连蛋白受体（L-02LnR)的抑制率为48．71％±3．79％（P＜0．001）。（4）Western-blotting和ELISA均证明7721LnR与L－02LnR与刀豆凝集素(Con A)的结合能力无明显差别，但与麦胚凝集素的结合能力存在显著差异。（5）N－糖链切除后，L－02LnR的对照组和实验组的竞争抑制率分别为44．82％和50．11％（P＞0．05），7721LnR分别为94．70％和50．35％。结论 （1）建立一个对稳定的肝癌细胞层粘连蛋白受体分离纯化的实验方法，分别从SMMC－7721肝部细胞和L－02正常肝细胞中分离纯化到67kD层粘连蛋白受体，并证明糖蛋白定位于细胞膜表面，与层粘连蛋白具有较高的亲和力。（2）SMMC－7721肝癌细胞和L－02正常肝细胞与层粘连蛋白结合能力的不同，7721LnR和L－02LnR与层粘连蛋白亲和力的不同，都是由于这两株细胞的层粘连蛋白受体的N－糖链结构不同所引起，表明糖链结构2与层粘连蛋白与其受体结合过程中起重要作用。