B区缺失型人FⅧ在酵母中的表达尝试

目的 尝试B区缺失型FⅧ在毕赤酵母 (P .pastoris)中的表达 ,探索rFⅧ在酵母中的表达情况和可能性。方法 将B区缺失型FⅧcDNA与质粒载体 pPICZaA酶切、连接 ,构建了酵母表达载体 pPICZα FⅧ ,电击转染GS115酵母细胞 ,甲醇诱导表达 ,一步法对表达产物进行活性检测并进行Dot Blot及Western Blot分析。结果 随着发酵时间的延长 ,表达产物的凝血时间越来越长 ,而蛋白表达量越来越高。结论 rFⅧ在酵母中的表达产物不稳定 ,表达水平较低 。