Gli1在胰腺癌细胞侵袭和迁移中的作用

The role of Gli1 in the invasion and migration of pancreatic cancer cells

目的 探讨脑胶质瘤相关癌基因-1（Gli1）在胰腺癌细胞侵袭和迁移中的作用及可能机制.方法 体外培养胰腺癌细胞株Capan-2,通过RNA干扰技术分别干扰Capan-2细胞中的Gli1、小鼠双微体基因2（MDM2）和p53基因的表达.应用实时定量（qRT）-PCR试验进行干扰效应的验证;通过细胞侵袭和迁移实验观察干扰Capan-2细胞中Gli1、MDM2和p53表达对胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响.同时通过Western blot法检测干扰Gli1表达后,金属基质蛋白酶-9（MMP-9）、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶（pERK）及磷酸化蛋白激酶B（pAKT）在Capan-2细胞中表达的变化.采用配对t检验对实验数据进行统计学分析.结果 qRT-PCR试验结果显示,干扰Gli1、MDM2、p53表达后,其mRNA水平较仅加脂质体组和对照组相比分别下调了70.5％和74.5％、61.8％和65.3％、73.8％和78.2％.在p53野生型Capan-2细胞中,干扰Gli1表达后胰腺癌细胞侵袭（94±8）和迁移能力（143±8）较对照组（150 ±7,190±10）均明显减弱（=6.584,P=0.022;t=8.266,P=0.014）;干扰MDM2表达亦降低了细胞的侵袭（实验组：85±12,对照组：138 ±6）和迁移能力（实验组：127 ±9,对照组：180±10）（t=5.097,P=0.036;t =4.860,P=0.040）.然而,体外干扰p53基因表达后,Capan-2细胞的侵袭（153 ±11）和迁移能力（209±13）较干扰前（106 ±7,164±8）却明显增强（t=4.669,P=0.043;t=4.990,P=0.038）.Western blot法检测结果显示,体外干扰Gli1表达后MMP-9蛋白表达水平下调,但pERK和pAKT蛋白水平表达无改变.结论 Gli1可能通过调控MDM2、p53及MMP-9的表达水平促进胰腺癌细胞的侵袭和迁移.

Objective To study the role and possible mechanism of glioma-associated oncogene-1 （Gli1） in regulating the cell invasion and migration of pancreatic cancer cells.Methods Quantitative realtime （qRT）-PCR was used to detect the effect of siRNA interference on Gli1,murine double minute 2 （MDM2） and p53 genes.Cell invasion and migration assays were used to observe the effect of Gli1,MDM2 and p53 silence on cell invasion and migration in p53 wild-type Capan-2 pancreatic cancer cells,respectively.Meanwhile,immunoblotting（IB） was used to detect the protein level of matrix metalloproteinase （MMP）-9,phospho-excelluar signal-regulated kinase （pERK） and phosphorylation protein kinase B （pAKT） in Gli1-silencing Capan-2 cells.The data were analyzed by paired t-test.Results qRT-PCR showed that the expression of Gli1,MDM2 and p53 is down-regulated 70.5％ and 74.5％,61.8％ and 65.3％,and 73.8％ and 78.2％ after siRNA interference,compared with the mock and siRNA control groups,respectively.Cell invasion（94 ± 8）and migration（143 ± 8） in p53 wild-type Capan-2 cells transfected with Gli1siRNA were significantly decreased,compared with the siRNA control group （150 ± 7,190 ± 10） （t =6.584,P =0.022 ;t =8.266,P =0.014）,while MDM2 silence inhibited cell invasion （experiment group：85 ± 12,control group：138 ± 6）and migration（experiment group：127 ± 9,control group：180 ± 10） in the same cells,respectively（t =5.097,P =0.036;t =4.860,P =0.040）.However,cell invasion（experiment group：153 ± 11,control group：106 ± 7） and migration （experiment group：209 ± 13,control group：164 ± 8） in p53-silencing Capan-2 cells were significantly enhanced （t =4.669,P =0.043 ; t =4.990,P =0.038）.IB showed that Gli1 silence down-regulated MMP-9 but not pERK and pAKT protein expression.Conclusion Gli1 might contribute to the cell invasion and migration in pancreatic cancer via the regulation of MDM2,p53 and MMP-9 expression.