富血小板纤维蛋白提取液对牙周膜成纤维细胞成骨能力影响的实验研究

The effects of platelet-rich fibrin extract (PRFe)on Periodontal ligament cell

目的:探讨富血小板纤维蛋白提取液(Platelet-rich fibrin extract,PRFe)对牙周膜成纤维细胞(Periodontal ligament cell PDLC)增殖、成骨分化的影响,以期为富血小板纤维蛋白在临床的应用提供理论基础。方法:实验分为实验组(P组)和对照组(D组),P组使用含PRFe的α-MEM成骨诱导培养液(10%胎牛血清、青霉素100mg/L、链霉素100mg/L、10-2mol/Lβ-甘油磷酸钠、10-7mol/L地塞米松、5mg/L抗坏血酸)培养细胞,D组则使用不含PRFe的α-MEM成骨诱导培养液。甲基噻唑基四唑(MTT)法测定1d、3d、5d的细胞增殖数;碱性磷酸酶(ALP)活性检测1d、3d、5d的成骨分化情况;荧光实时定量PCR测定Runx2 mRNA和OCN mRNA基因分别在3d、7d的表达。结果:MTT显示:随培养时间延长,细胞数量逐渐增加,在各时间点,P组细胞的吸光度值(1d:0.235±0.012,3d:0.270±0.014,5d:0.686±0.040)均明显高于D组(1d:0.201±0.011,3d:0.286±0.020,5d:0.426±0.024),差异有统计学意义(P<0.05)。ALP活性:随着培养时间延长而增加,P组的增加更为显著,在各时间点,P组的吸光度值(1d:0.124±0.018,3d:0.176±0.013,5d:0.361±0.021)均显著大于D组(1d:0.103±0.011,3d:0.123±0.012,5d:0.162±0.014),差异有统计学意义(P<0.05)。荧光实时定量PCR:随着培养时间延长,两组细胞的基因表达量逐渐增加,将D组3d时基因表达水平定义为1,进行组内标准化,P组细胞的Runx2和OCN基因表达量(3d时分别为1.751±0.136,1.510±0.129;7d时分别为2.287±0.165,2.103±0.042)显著高于D组(3d时两个基因均为1;7d时分别为:1.367±0.121,1.208±0.051),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PRFe能有效地促进牙周膜成纤维细胞的增殖活性及成骨分化。

Objective： To evaluate the effect of platelet-rich fibrin extract （PRFe） on proliferation and bone differentiation of Periodontal ligament cell. Methods： Trials are divided into the experimental group（P） and the control group（D）, group P use the osteogenic induction α-MEM（10% FBS, penicillin100 mg/L, streptomycin100mg/L, 10-2mol/L sodium β-glycerophosphate, 10-7mol/L dexamethasone, 5mg/L vitamin C） containing PRFe, while group D just use the osteogenic induction α-MEM. MTT assay to detect the number of the osteoblasts at 1d, 3d, 5d;the activity of alkaline phosphatase（ALP） to detect the differen-tiation of osteoblast at 1d, 3d, 5d; mean while,the level of osteogenetic biomarkers Runx2 and OCN at 3d, 7d were quantified by real-time PCR. Results： MTT assay： At 1d, 3d, 5d, a significant increase of absorbance were showed in group P（1d： 0.235±0.012, 3d： 0.270±0.014, 5d： 0.686±0.040） than group D （1d：0.201 ±0.011, 3d： 0.286 ±0.020, 5d： 0.426 ±0.024）（P＆lt;0.05）. ALP activity： At 1d, 3d, 5d, the ab-sorbance of group P （1d：0.124 ±0.018,3d：0.176 ±0.013,5d：0.361 ±0.021）was significant higher than group D（1d：0.103±0.011,3d：0.123±0.012,5d：0.162±0.014）（p＆lt;0.05）. Realtime PCR： As the standard-ization in the group,the gene expression level of group D at 3d were defined as 1, the Runx2 and OCN gene expression in group P （Cfba1, 3d：1.751 ±0.136, 7d： 2.287 ±0.165; OCN, 3d：1.510 ±0.129, 7d：2.103 ±0.042） are larger than group D （Cfba1, 3d：1, 7d：1.367 ±0.121; OCN, 3d：1, 7d： 1.208 ±0.051） （P＆lt;0.05）. Conclusions： Our work confirmed that PRFe is useful in stimulating the proliferation and bone differentiation of Periodontal ligament cell.