全骨髓贴壁法体外分离培养兔骨髓间充质干细胞

目的采用全骨髓贴壁法体外分离培养兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),并进行成骨、脂肪细胞诱导分化及鉴定。方法采用全骨髓贴壁法分离培养兔BMSCs,倒置显微镜下观察细胞的形态及生长状况;分别绘制BMSCs的生长曲线及贴壁率曲线,检测细胞活性;诱导细胞向脂肪及成骨细胞方向分化,检测细胞的多向分化潜能。结果分离培养的原代BMSCs 24 h出现贴壁现象,6 d后出现明显的集落生长,传代后细胞呈长梭形,形态均一,纯度高。P3代细胞培养2 h贴壁30%以上,4 h贴壁60%,8 h贴壁70%以上,12 h贴壁90%。细胞生长曲线呈S形,显示细胞分别在第2、3、8天进入潜伏期、对数期、平台期。加入成骨及脂肪细胞诱导剂后,细胞碱性磷酸酶及油红O染色均阳性,表现出成骨及脂肪细胞的生物学特征。结论全骨髓贴壁法分离培养获得的细胞纯度较高,活性较强,增殖快,且具有BMSCs的一般生物学特性,此方法可以作为组织工程获取BMSCs的一种常用方法。