内标实时荧光RT-PCR检测鸡新城疫病毒方法的建立

为了建立对鸡新城疫病毒（NDV）快速准确的检测方法,根据NDV基因序列特点,在全序列6 997到7 092之间的位点设计1对特异性引物和1条TaqMan探针,通过对反应体系的优化,建立了鸡新城疫病毒实时荧光RT-PCR快速检测方法,并且制备了参与提取和反应的监控内标,有效地控制了假阴性结果.结果表明：该方法特异性强,对8份已知病毒样本的检测结果中,特异性为100％;所建立的方法灵敏度高,能检出0.1 TCID5o/mL的病毒液,比普通RT-PCR检测的灵敏度要高出100倍;平行管检测和隔期检测其Ct值的变异系数分别在0.21％～0.83％和0.68％ ～ 1.47％之间,结果无明显差异;采用所建立的方法对132份疑似临床样本进行检测的结果中,组织样本和双拭子样本检测的阳性率分别为26.2％和37.8％,比新城疫普通RT-PCR的检出率分别高出7.2和5.6个百分点,表明所建立的检测方法具有良好的实用性.