新城疫病毒NP基因的克隆与原核表达研究

参照GenBank新城疫病毒(NDV)LaSota株NP基因序列,设计并合成1对特异性引物。提取NDV LaSota株基因组RNA,利用RT-PCR方法扩增出NP基因片段,将其克隆至pBluscriptⅡKS(+/-)多克隆位点,经PCR检测、酶切及测序检测,结果表明成功克隆获得NP基因。再将NP基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-NDV-NP。经酶切、PCR鉴定后的阳性重组质粒转化感受态BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE分析结果表明,获得该蛋白的高效表达,主要以可溶性形式存在。Western-blot分析表明重组蛋白具有良好的反应原性。