早期香烟烟雾暴露对哮喘小鼠T细胞亚群功能的影响

Effects of early cigarette smoke exposure on the functions of T-lymphocyte subsets in asthmatic mice

目的 探讨早期香烟烟雾暴露对哮喘小鼠T细胞亚群功能的影响.方法 40只20日龄BALB/c小鼠按随机数字表法随机分为4组：空气对照组、烟雾对照组,空气＋致敏组、烟雾＋致敏组,每组10只.其中烟雾对照组和烟雾＋致敏组给予香烟烟雾暴露3周,其他2组暴露于空气中作对照;8周龄时,空气＋致敏组和烟雾＋致敏组给予卵清蛋白（OVA）致敏建立小鼠哮喘模型,其他2组给予生理盐水作对照.通过流式细胞术检测各组脾单个核细胞中T细胞亚群调节性T细胞（Treg）和效应性T细胞（Te）亚群包括辅助性T细胞Th1、Th2、Th17的百分比,酶联免疫吸附（ELISA）法检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中转化生长因子（TGF）-β、白细胞介素（IL）-4、IL-5、IL-10、IL-13、IL-17A和γ干扰素（IFN-γ）的含量,并比较各组脾单个核细胞中Treg与Te百分比的比值.结果 烟雾＋致敏组脾单个核细胞中的Th1、Th2、Th17、Treg百分比分别为（21.47±2.84）％、（16.33±3.02）％、（1.89±0.23）％、（2.92 ±0.40）％,均显著高于空气＋致敏组的（14.78±2.21）％、（9.72±1.46）％、（1.01 ±0.12）％、（1.84±0.22）％,BALF中IL-4、IL-5、IL-10、IL-13、IL-17A、IFN-γ、TGF-β含量分别为（138.6±18.9）、（195.3 ±32.6）、（22.8±3.9）、（716.9±123.6）、（62.8±7.9）、（173.2±25.5）、（66.5±8.2） ng/L,也均显著高于空气＋致敏组的（90.1±13.7）、（128.5±21.8）、（14.4±2.9）、（421.4 ±60.4）、（40.4±6.2）、（113.8±16.9）、（42.9±3.8）ng/L（均P＜0.05）;但空气＋致敏组与烟雾＋致敏组脾单个核细胞中的Treg与Te百分比比值差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 早期香烟烟雾暴露可显著加剧哮喘小鼠T细胞亚群功能的紊乱.

Objective To explore the effects of early cigarette smoke exposure on the immune functions of T-lymphocyte subsets in asthmatic mice model.Methods Forty mice （20 days） were randomly allocated into four groups：air control group,cigarette smoke （CS） control group,air ＋ ovalbumin （OVA） group,and CS ＋ OVA group （n =10 each）.The CS control and CS ＋ OVA groups were exposed to cigarette smoke for 3 weeks while the other two groups exposed to air.At an age of 8 weeks,air ＋ OVA and CS ＋ OVA groups had OVA sensitization for establishing an asthma model while the other two groups were selected as control.The percentage of regulatory T cells （Treg）,effect of T cell （Te） subgroup including T helper type （Th）1,Th2 and Th17 in splenic mononuclear T cell were determined by flow cytometry.The levels of transforming growth factor-β （TGF-β）,interleukin （IL）-4,IL-5,IL-10,IL-13,IL-17A and interferon-γ （IFN-γ） in bronchoalveolar lavage fluid （BALF） were measured by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）.And the percentage ratios of Treg to Te were compared among four groups.Results The percentages of Th1,Th2,Th17 and Treg in splenic mononuclear of CS ＋ OVA group （（21.47 ±2.84）％,（16.33 ± 3.02） ％,（1.89 ± 0.23） ％ and （2.92 ± 0.40） ％,respectively） were all significantly higher than those in air ＋ OVA group （（14.78 ± 2.21） ％,（9.72 ± 1.46） ％,（1.01 ± 0.12） ％ and （1.84 ± 0.22）％,respectively）,the levels of IL-4,IL-5,IL-10,IL-13,IL-17A,IFN-γand TGF-β in BALF of CS＋OVA group （（138.6±18.9）,（195.3 ±32.6）,（22.8 ±3.9）,（716.9 ±123.6）,（62.8 ±7.9）,（173.2 ± 25.5） and （66.5 ± 8.2） ng/L,respectively） were all significantly higher than those in air ＋ OVA group （（90.1±13.7）,（128.5 ±21.8）,（14.4±2.9）,（421.4 ±60.4）,（40.4±6.2）,（113.8 ± 16.9） and （42.9 ± 3.8） ng/L,respectively） （all P ＜ 0.05）.No significant difference of Treg/Te percentage ratio existed in mice spleen mononuclear cells between air ＋ OVA group and CS ＋ OVA group （P ＞0.05）.Conclusion Early cigarette smoke exposure could significantly exacerbate T cell immune dysfunction in asthmatic mice.