胎鼠海马神经元的无血清原代培养方法与形态学观察

目的建立SD大鼠胎鼠海马神经元的分离、培养方法，观察体外培养过程中神经元的形态学变化，为进行海马神经元的体外研究提供技术支持。方法分离18天胎龄的SD大鼠胎鼠的海马区，经机械吹打，台盼蓝计数后，采用无血清培养基接种于24孔板。每天在显微镜下进行神经元的形态观察；第7天用免疫组化染色法检测微管相关蛋白2（MAP2）的表达，进行神经元鉴定及纯度计算。结果机械分离18天胎龄的SD大鼠胎鼠海马得到细胞，经台盼蓝染色，细胞存活率在98％以上。神经元在体外生长良好，培养第7．10天时胞体最为丰满，神经元突起间互相接触形成致密的网络，28天时细胞数量明显减少，可见大量变性的神经元细胞碎片。MAP2鉴定结果显示，培养7天的海马神经元纯度为92．8％。结论此培养方法获得的海马神经元纯度高、体外存活时间长，具有简便易行，结果稳定的优点，可作为神经元体外培养的良好模型。