摘要
利用正交设计L16(45)对金线莲ISSR-PCR反应体系的5因素(模板DNA、Taq酶、引物、Mg2+和dNTP)在4个水平上进行优化试验,采用直观分析法获得影响因素最佳反应水平。结果表明:最终建立的金线莲ISSR-PCR的最佳反应体系为,在25μL的反应体系中,DNA模板为40ng、Taq酶为1.60U、引物浓度为0.80mmol/L、dNTP浓度为0.96mmol/L、Mg2+浓度为2.40mmol/L。该反应体系的建立为金线莲种质资源分类、遗传多样性分析提供了更客观可靠的方法。
The orthogonal design was used to optimize ISSR-PCR amplification system on Anoectochilus roxburghii in four levels of five factors（DNA template,Taq DNA polymerase,primer,Mg^2＋,and dNTP）respectively.The results showed that a suitable ISSR-PCR reaction system was established,namely 25μL reaction system containing 40 ng DNA template,1.60 UTaq DNA polymerase,0.80mmol/L primer,0.96mmol/L dNTP,2.40mmol/L Mg^2＋.In conclusion,this established ISSR-PCR reaction system provide an available and reliable method for genetic diversity analysis and germplasm clssificatin of Anoectochilus roxburghii.
出处
《北方园艺》
CAS
北大核心
2014年第18期118-122,共5页
Northern Horticulture
基金
云南省教育厅科学研究基金资助项目(2013Y123)
