青海湖裸鲤HIF-2α基因的克隆及其ODD功能域羟化分析

The cloning of HIF-2α gene and hydroxylation assay of HIF-2α ODD domain in naked carp from Qinghai lake

目的:克隆青海湖裸鲤低氧诱导因子-2α(HIF-2α)完整编码区,并分析HIF-2αODD域与脯氨酸羟化酶3(PHD3)的相互作用。方法:通过RT-PCR与RACE克隆青海湖裸鲤HIF-2α基因序列,GST pull-down法分析HIF-2αODD域能否与PHD3相互结合。结果:获得的青海湖裸鲤HIF-2αcDNA序列长为3 013 bp,其中开放阅读框(ORF)为2 502 bp。GST pull-down分析表明,HIF-2αODD域羟化后能与PHD3形成酶/底物聚合物。结论:青海湖裸鲤HIF-2αODD域没有发生类似HIF-1α的羟化位点变异,能够被PHD3正常识别并结合。