高原环境兔髓间充质干细胞原代培养及体外生长特性研究

目的研究高原环境骨髓间充质干细胞体外培养及生长特性。方法无菌条件下分离提取乳兔骨髓间充质干细胞,然后使用血清体积分数为0.15的L-DMEM培养基接种于33mm培养皿中并置于37℃,5%CO2培养箱中进行培养。台盼兰染色检测细胞的成活率(死亡细胞被染成蓝色,活细胞拒染呈无色透明状),并观察骨髓间充质干细胞的形态学变化,应用CCK8法绘制细胞生长曲线,血球计数法进行细胞计数。结果细胞接种0d时镜下肉眼见细胞形态为圆形;1d后细胞开始贴壁;3d天后镜下可见细胞形态为梭形有伪足伸出;5d天后镜子下可见细胞簇的形成,8d天后细胞融合成片。不同时间点分别计数1000个细胞,初接种时蓝染细胞53个,成活率为94.70%;细胞接种24小时后蓝染细胞69个,成活率为93.10%。生长曲线显示细胞生长过程分为潜伏期、对数生长期和平台期三个阶段。结论高原环境能够进行体外动物骨髓间充质干细胞培养。