脂质体转染大鼠肝星状细胞的实验研究

目的运用脂质体Lipofectamine 2000转染大鼠肝星状细胞(HSC-T6),比较不同质粒与脂质体比例及不同时刻转染HSC后绿色荧光蛋白的表达,确定高表达阳性克隆G418筛选条件。方法将细胞按质粒与脂质体的不同比例分为四组:A组(2ug:3u L),B组(2ug:4u L),C组(2ug:5u L),D组(2ug:6u L)混合后转染大鼠HSC,约24 h观察转染率,以最高转染率的质粒与脂质体混合,转染大鼠HSC,比较转染后24、48、72 h的转染率;用不同浓度G418进行筛选,确定筛选最佳浓度,通过G418筛选建立高表达EGFP的HSC-T6阳性克隆。结果转染24 h后,各组均有绿色荧光蛋白的表达,与A、B、D组比较,C组转染率明显增高(P<0.05),质粒与脂质体以2ug:5u L转染HSC后,随时间延长,转染后48 h转染率最高(P<0.05),72 h有所下降,G418筛选最佳浓度为400 ug/m L,经筛选约21d后可阳性克隆,更换为正常培养液可继续培养和传代。结论 Lipofectamine 2000可有效转染HSC,经G418筛选形成阳性克隆,为基因治疗肝纤维化的研究提供依据。