鞘内注射KN93对神经病理性疼痛大鼠痛行为学的影响

Effect of intrathecal injection of KN93 on pain behaviors in rats with neuropathic pain

目的观察鞘内注射钙，钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（Ca2＋／calmodulin dependent proteinkinaseⅡ，CaMKⅡ）抑制剂KN93对腰背根神经节慢性压迫（chronic compression of dorsal root ganglion，CCD）大鼠神经病理性疼痛的影响。方法SD雄性大鼠48只，按随机数字表法分为3组：假手术组（S组，11只）、CCD模型组（C组，11只）、KN93组（K组，26只）。C组、K组制备CCD模型，S组仅暴露L。椎间隙。术后14dS组和C组鞘内注射10％溶媒二甲基亚砜（dimethylsulfoxide，DMSO）25μl，K组鞘内注射溶于10％DMSO的KN9350μg／25μl。各组在造模前1d（t1），造模后4（t2）、7（t3）、10（t4）、14d（t5）随机取8只大鼠检测热缩足反射潜伏期（paw withdrawal thermal latency，PWTL）和机械缩足反射阈值（paw withdrawal mechanical threshold，PWMT）；并于鞘内注射DMSO或KN93后2（t6）、4（t7）、10（t8）、12（t9）、24h（t10）时进行相同的行为学检测。各组于给药前以及K组的给药后各时间点（t6．t9）随机取8只大鼠处死并取脊髓腰膨大部分，采用Westernblot方法检测CaMK11蛋白表达水平。结果鞘内给药后t6．t9时点，K组PWTL[（14．7±1．6）、（18．6±1．8）、（21．2±2．5）、（15．3±2．0）S]，PWMT[（12．0±1．0）、（15．4±1．4）、（17．5±1．7）、（14．9±1．6）g]比C组PWTL[（11．6±1．8）、（10．7±1．7）、（11．7±2．4）、（9．9±1．7）s]，PWMT[（8．4±0．9）、（9．6±1．6）、（10．6±1．7）、（8．9±1．3）g]升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。给药前及给药后t10时，K组PWTL、PWMT与C组比较，差异无统计学意义（P〉0．05o和t5时CaMKII值（1．55±0．12）比较，给药后t6～t9时间点CaMKⅡ蛋白[（1．37±0．11），（1．15±0．12）、（0．75±0．08）、（0．86±0．12）]表达下降（P〈0．05）。结论鞘内注射KN93可有效缓解神经病理性疼痛大鼠的疼痛反应。

Objective To investigate the effect of KN93, an inhibitor of Ca2 ＋/calmodulin dependent protein kinase Ⅱ （CaMK Ⅱ ）, on the neuropathic pain of the chronic compression of dorsal root ganglion （CCD） model rats. Methods Forty-eight male SD rats were randomly divided into 3 groups： sham group （group S, n=11 ）, CCD model group （group C, n=11 ）, KN93 group （group K, n=26） . Group C and group K were operated with the model of neuropathic pain induced by CCD, group S were treated as sham operated rats. Fourteen days after operation, group S and group C received intrathecal injection of 10% dimethyl sulfoxide （DMSO） 25 μl, while group K received intrathecal injection of 50 μg KN93 dissolved in 25 μ1 10% DMSO. Pain behavior tests including paw withdrawal thermal latency （PWTL） and paw withdrawal mechanical threshold （PWMT） were detected on eight rats randomly selected from each group before（t1 ） and 4（t2）, 7（t3）, 10（t4）, 14 d（t5） after operation. Group S, group C and group K also received the same tests 2（t6）, 4（t7）, 10（t8）, 12（t9）, 24 hi 10） after administration of DMSO or KN93. In all three groups before administration and in group K after administration at each time point （t6-t9）, 3 randomly selected rats were sacrificed and each expansion part of spinal cord was obtained. Western blot was used to detect the expression level of CaMK Ⅱ protein. Results From t6 to t9 after administration, group K PWTL[ （14.7±1.6）, （18.6±1.8）, ＇（21.2±2.5）, （15.3±2.0） s] and PWMT[ （12.0±1.0）, （15.4±1.4）, （ 17.5±1.7 ）, （14.9±1.6） g ] were increased when compared with group C PWTL[ （ 11.6±1.8 ）, （ 10.7±1.7 ）, （11.7±2.4）, （9.9±1.7） s] and PWMT[（8.4±0.9）, （9.6±1.6）, （10.6±1.7）, （8.9±1.3） g]（P〈0.05）. Before and 24 h（tl0） after administration, group K PWTL and PWMT had no significant difference when compared with group C （P〉0.05）. Compared to the basic value（t5） （1.55±0.12） prior to the administration, the expression of CaMK Ⅱ from t6 to t9[ （ 1.37±0.11 ）, （1.15±0.12）, （0.75±0.08）, （0.86±0.12） ] were significantly decreased （P〈0.05）. Conclusions Intrathecal administration of KN93 may play an important role in relieving pain of neuropathie pain rats.