杏鲍菇漆酶基因原核表达载体的构建及乳酸菌的遗传转化

为获得有效表达的产漆酶乳杆菌工程菌和既可以产乳酸又可以产漆酶的益生菌制剂。以杏鲍菇为试验材料,利用RT-PCR方法,克隆漆酶基因,将其与乳酸菌食品级表达载体质粒p MG36e进行连接,构建漆酶乳酸杆菌表达载体质粒p MG36e-Lacc1,通过电激转化法使其进入从青贮饲料中提取的布氏乳杆菌中,并探究影响布氏乳杆菌电转化的最适条件。试验结果表明:扩增得到长度为1 596 bp的漆酶基因片段,成功构建漆酶乳酸杆菌表达重组质粒,利用电激转化技术使其导入布氏乳杆菌基因组中,研究表明当电场强度达到1.75 k V,用SMRS培养基复苏培养1.5 h后,得到较高的电激转化率。