小鼠足细胞Tbxa2r基因敲低方法探讨

目的设计并筛选对足细胞血栓素A2受体(Tbxa2r)基因表达敲低效果最佳的siRNA序列。方法培养永生性小鼠足细胞(MPC5),取生长占培养板70%细胞用于实验。设计4条siRNA序列(Tbxa2r-mus-1150、Tbxa2r-mus-1309、Tbxa2r-mus-1677、Tbxa2r-mus-1884),经转染效率验证后转染足细胞。将细胞分为四组:干扰组(以筛选出的干扰序列转染细胞)、空白组(正常细胞样品)、模拟组(只加转染试剂的细胞样品)、阴性对照组(转染无序干扰系列的细胞样品)。Real-time PCR检测各组细胞Tbxa2r基因,Western blot法检测Tbxa2r蛋白。结果筛选出干扰效果最强的siRNA序列Tbxa2r-mus-1677,其转染24 h后对Tbxa2r基因表达干扰效果较小,而在转染48 h后足细胞Tbxa2r基因相对表达量最低。转染72 h后,细胞Tbxa2r蛋白相对表达量明显降低。结论采用Tbxa2r特异性siRNA技术成功敲低足细胞Tbxa2r基因表达,并筛选出敲低效果最佳的siRNA序列。