流行性乙型脑炎/登革病毒1型嵌合基因的构建和鉴定

目的构建和鉴定流行性乙型脑炎(乙脑)/登革病毒1型(DV1)/JEV pr ME嵌合基因。方法利用分子生物学技术构建登革病毒和乙脑病毒嵌合的pr ME嵌合基因,重叠PCR法鉴定;在质粒载体pc DNA3.1(+)的基础上,构建表达pc DV1/JEV pr ME的重组质粒载体,利用LipofectamineTM2000将登革/乙脑pr ME嵌合质粒转染至BHK-21细胞,间接免疫荧光法检测pr ME蛋白在细胞中的表达。结果 DNA测序结果证实pc DV1/JEV pr ME重组质粒完全正确,成功构建的登革/乙脑嵌合质粒在BHK-21细胞中能够表达pr ME蛋白。结论通过一系列的鉴定手段,可以认定本实验中构建的登革/乙脑嵌合质粒能够在真核细胞中顺利表达。