金铁锁全长cDNA文库的SMARTer技术构建

目的构建金铁锁全长cDNA文库,为进一步开展金铁锁次生代谢合成途径相关基因的研究奠定基础。方法利用Rneasy Plant Mini Kit(Qiagen)试剂盒提取金铁锁根部总RNA,通过SMARTer(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术构建全长cDNA文库,测定分析文库重组率及插入片段大小,对文库进行随机测序并通过Blastx分析后在Genbank中进行同源性检索和功能分析。结果使用SMARTer技术构建的金铁锁cDNA文库的质量较高,在随机挑选的单菌落克隆中都有插入片段,重组率为100%;在15个单克隆中,扩增片段长度在750bp以上的有14个,占93.3%。结论利用SMARTer技术成功构建了金铁锁根部的全长cDNA文库,该文库可用于金铁锁今后功能基因组鉴定、新基因筛选及次生代谢产物生物合成的表达调控研究。