重组人干扰素α-2b中残余假单胞菌菌体蛋白定量ELISA检测方法的建立

Development of quantification ELISA detection method for residue Pseudomonas bacteria protein in recombinant human interferon α-2b

目的 建立假单胞菌菌体蛋白的双抗体夹心酶联免疫吸附分析（ELISA）定量检测方法，用于重组人干扰素α-2b中残余宿主菌菌体蛋白（HCP）含量的检测。方法 采用带有不含干扰素基因空质粒的假单胞菌，按既定工艺发酵纯化并制备HCP，免疫小鼠和白兔后制备抗HCP多抗体，以抗HCP兔抗体为包被抗体，将抗HCP鼠抗体标记辣根过氧化物酶（HRP）为酶联抗体，建立双抗体夹心ELISA法，并对该方法进行验证及应用。结果 所建立的方法线性范围为2.5 - 80.0 ng/mL，相关系数R2 〉 0.98，定量限为2.5 ng/mL；检测不同浓度的加样回收样品，回收率为85 % - 115 %，变异系数均 〈 10 %；与重组人干扰素α-2b和牛血清白蛋白（BSA）均无交叉反应；检测3批供试品，准确度及重现性良好。结论 已建立假单胞菌菌体蛋白的双抗体夹心ELISA定量检测方法，该方法线性好，专属性强，灵敏度高，准确度和精密度较高，可用于重组人干扰素α-2b中HCP的质量控制。