副猪嗜血杆菌外膜蛋白OmpP2的原核表达与鉴定

为获得副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白中的穿孔素前体蛋白P2(Omp P2)基因的表达产物,利用特异性引物以HPS血清13型江西分离株扩增omp P2基因,并将其克隆到p MD18-T载体中进行序列测定和分析。结果表明:omp P2全基因含一个1 092 bp的开放阅读框,编码一个含363个氨基酸的蛋白,与所报道的HPS omp P2基因(登录号:HM172029.1)的同源性为100%。再将其亚克隆于原核表达载体p ET-32a(+)中构建重组表达质粒p ET-32a(+)-omp P2。后转化至受体菌大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导。经SDS-PAGE检测,表达的重组蛋白分子质量与预期的58 ku一致。Western blot分析表明,表达产物与HPS阳性血清能发生反应,显示表达产物具有良好的反应活性。