凉膈散经胆碱能信号通路拮抗LPS所致小鼠巨噬细胞RAW264.7损伤的作用机制研究

目的研究清热泻火经典方剂＂膈散（LGS）拮抗LPS所致小鼠巨噬细胞RAW 264.7损伤的作用机制.方法采用MTT法评价LGS对RAW 264.7细胞的毒性.用LPS（1mg·L^-1）刺激RAW 264.7细胞产生炎症,并用ELISA法检测LGS对LPS诱导产生的炎症因子TNF-α、IL-6的影响.采用Westernblot、免疫荧光、EM-SA法检测LGS对LPS刺激RAW 264.7细胞所致NF-κBp65入核的影响.采用Westernblot检测LGS对α7nAchR蛋白表达的影响以及α7nAchR抑制（α7nAchRsiRNA、α7nAchR抑制剂甲基牛扁碱）或激动（α7nAchR激活剂PUN282987）后,LGS对NF-κB相关蛋白表达的影响.结果LGS在非毒剂量（25～400mg·L^-1）下就可明显抑制LPS诱导产生的炎症因子TNF-α和IL-6、IκB-α和NF-κBp65的磷酸化、NF-κBp65入核以及提高α7nAchR蛋白表达.并且α7nAchR抑制或激动后,LGS对IκB-α、NF-κBp65磷酸化的抑制作用将减弱或增强.结论LGS经乙酰胆碱抗炎通路关键蛋白α7nAchR调控NF-κB相关蛋白表达,从而拮抗LPS诱导的炎症反应.