鸭肝炎病毒基因CRT-PCR快速检测型和A型一步法双重方法的建立和应用

根椐GenBank中已发表的基因C型鸭肝炎病毒(DHV-C)和基因A型鸭肝炎病毒(DHV-A)2种病毒基因序列,分别设计2对特异性引物。在建立2种病毒单项一步法RT-PCR检测方法的基础上,优化一步法双重RT-PCR反应条件,建立了2种病毒的一步法双重RT-PCR检测方法,用这2对引物对同一样品中的DHV-C、DHV-A核酸模板进行一步法双重RT-PCR扩增,结果可同时扩增DHV-C的270bp和DHV-A的479bp的特异性片段,而对其他4种鸭源病原的扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,该方法能检出10 pg的DHV-C和10 pg的DHV-A模板。通过对68份临床病料检测,将建立的一步法双重RT-PCR技术和单项一步法RT-PCR方法进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为100%。表明建立的一步法双重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对DHV-C和DHV-A的同时检测和鉴别诊断。