养阴益气活血法对糖尿病大血管病变KK-Ay小鼠Epb 4.1基因超甲基化的抑制作用

目的探讨糖尿病大血管病变KK-Ay小鼠细胞膜骨架成分带4.1蛋白Epb4.1基因的表观遗传学变化,及使用中药(参芪复方)、西药(二甲双胍)分别干预后该基因甲基化修饰的改变,从而摸索Epb 4.1基因与糖尿病大血管病变发生发展之间的关联。方法 8周龄SPF级雄性自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠20只,随机分为空白组、模型组、参芪复方组、二甲双胍组。高脂饲料连续饲养8周,建立糖尿病大血管病变模型。造模后与中药参芪复方及西药二甲双胍分别干预参芪复方组和二甲双胍组,疗程均为6周。监测动物血糖、体重。第14周末处死全部动物,取腹主动脉做HE染色及TUNEL细胞凋亡检测;每组随机抽取1只小鼠胸主动脉做甲基化免疫共沉淀检测。结果第14周末,模型组小鼠血糖、体重及内皮细胞凋亡率显著高于空白组(P<0.01);HE染色可见胸主动脉血管内膜不光滑,内皮细胞肿胀,炎细胞浸润,内皮细胞轻度脱落。参芪复方组小鼠血糖、体重、内皮细胞凋亡率均较模型组明显降低(P<0.01),与二甲双胍组之间无明显差异(P>0.05)。模型组、参芪复方组、二甲双胍组的甲基化程度均高于空白组;其中模型组的甲基化程度又高于参芪复方组和二甲双胍组;而参芪复方组的甲基化程度低于二甲双胍组。其中参芪复方降低甲基化修饰的基因片段发生于更为关键的区域(CGI、CGI shore、TTR),而二甲双胍组则发生于内含子区域。各组间甲基化差异比较的P值均小于等于0.001。结论糖尿病大血管病变动物血管Epb 4.1基因的超甲基化程度与血管病变的严重程度呈正比。益气养阴活血法(参芪复方)对糖尿病大血管病变动物的降糖、减重作用与二甲双胍基本相当,对血管的保护作用在组织水平上与二甲双胍不相上下,而在基因水平上则较二甲双胍具有更好的降低Epb 4.1基因关键位点超甲基化修饰的作用。