新型丙型病毒肝炎病毒core及NS3抗原的研发及制备

目的建立大规模生产与纯化工艺,为献血者HCV感染筛查或临床诊断提供新一代免疫测定新型抗原。方法利用聚合酶链反应(PCR)从我国HCV流行株(基因型1b)中分离core与NS3全长基因。采用重组慢病毒包装系统,构建分别表达HCV core与NS3的表达质粒与重组病毒。利用重组慢病毒感染293A或Huh7细胞,采用免疫荧光染色、West Blot和ELISA方法测定细胞表达的core或NS3蛋白抗原特性。结果构建了pTY-CMV-core和pTY-CMV-NS3慢病毒表达质粒,包装出了高病毒滴度的重组慢病毒。质粒转染293T细胞后,免疫荧光能检呈强阳性,Western Blot分析可见预期大小分子量的表达蛋白。