重组H9N2亚型禽流感病毒的构建及其在A549细胞上适应性研究

目的:利用反向遗传技术构建表达GFP并具有感染性的重组H9N2亚型禽流感病毒,并用高剂量和低剂量MOI病毒感染肿瘤细胞A549,研究其对A549肿瘤细胞的作用。方法:以A/Chicken/Jiangsu/14(H9N2)禽流感病毒为骨架,在NS1和NEP之间插入外源片段GFP。参考8质粒转染系统,在293T和MDCK细胞上包装产生重组H9N2病毒。提取尿囊液RNA,PCR鉴定并测序,检测其TCID50。按照MOI 0.1和2.0分别将重组病毒感染不同的细胞,通过MTT实验检测细胞活性。结果:应用反向遗传技术成功获得了重组病毒,并且发现病毒可以诱导A549的凋亡。结论:成功构建了表达GFP的重组病毒,并且其可以诱导A549的凋亡。