HIV-1逆转录酶的表达、纯化及晶体生长条件的摸索

利用大肠杆菌原核表达系统对HIV-1 RT蛋白进行表达,纯化以及晶体生长条件的搜索。以PNL4-3为模板,通过聚合酶链式反应扩增出HIV-1 RT蛋白的基因,将扩增出的目的基因克隆到表达载体Pet-duet中,构建HIV-1逆转录酶的重组质粒,重组质粒转化表达菌株BL21(DE3)进行诱导表达。HIV-1逆转录酶主要以可溶形式表达,经亲和柱Ni2+-NTA,阴离子交换柱MONOQ,分子筛进行纯化后获得了蛋白,其纯度达到85%-90%,基本满足了晶体生长条件的要求。对晶体生长条件行了初筛,最终并获得了HIV-1 RT的蛋白晶体,为蛋白晶体的优化以及蛋白结构的研究奠定了基础。