构建携带nurr1基因的慢病毒表达载体及转染人脐带间充质干细胞的实验研究

目的构建携带核受体相关因子^(-1)(nuclear receptor related factor 1,nurr1)基因的慢病毒表达载体,并测定其对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)的感染效率。方法使用PCR技术克隆目的nurr1基因,将nurr1基因重组到慢病毒表达载体,筛选阳性克隆,将携带nurr1基因的质粒用脂质体介导法转染入293T细胞,获得携带nurr1基因的重组慢病毒,再用重组慢病毒感染hUCMSCs,通过荧光显微镜及流式细胞术检测其感染效率。结果成功构建了携带nurr1基因的重组慢病毒载体,并获得病毒滴度为2×108 TU·mL^(-1)的慢病毒浓缩液。成功转染重组慢病毒的hUCMSCs可表达绿色荧光蛋白,当病毒感染复数(multiple of infection,MOI)值为60时转染效率最高为90.8%。结论携带nurr1基因的慢病毒载体成功构建并成功转染入hUCMSCs,当MOI值为60时转染效率最高。