非小细胞肺癌源性外泌体提取方法探讨

目的 :比较3种提取非小细胞肺癌A549细胞培养上清中外泌体(Exosomes)的方法 ,为获得高质量的Exosomes提供参考。方法:分别采取超速离心法、进口Exo Quick-TC提取法、国产Ribo提取法提取A549细胞培养上清中的Exosomes。利用透射电镜进行形态学观察,2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠法进行蛋白定量,Western blot检测Exosomes表面标志物CD63表达。结果:3种方法均可提取到Exosomes,电镜下可观察到圆形膜性囊泡结构。进口Exo Quick-TC提取法及国产Ribo提取法提取样本浓度显著高于超速离心法(P<0.05);3种方法提取样本均有Exosomes特异性标志蛋白CD63表达,超速离心法CD63表达最高。结论:超速离心法、进口Exo Quick-TC提取法、国产Ribo提取法均可成功分离Exosomes,超速离心法获得的Exosomes纯度较高,应用试剂盒方法获得的Exosomes浓度高。