miR-181a吸附海绵载体改善肝细胞胰岛素抵抗作用研究

目的:构建对肝癌细胞系HepG2中内源性成熟miR-181a具有的抑制作用的特异性吸附海绵载体(miR-181a-sponge),验证其在葡萄糖胺诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗模型中改善胰岛素敏感性的作用。方法:针对成熟人源miR-181a的序列,设计在9-12位发生突变的反义序列,并重复7个拷贝,串联至pEGFP-C2真核表达载体及pGL3-Promoter载体中,通过双荧光素酶报告基因系统验证该吸附海绵的效果;同时在葡萄糖胺诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗模型中转染miR-181a吸附海绵载体,检测细胞对胰岛素刺激的应答效果。结果:pEGFP-C2-181a-SP载体可以成功的在细胞中表达,其绿色荧光呈阳性。双荧光素酶报告基因系统显示,pEGFP-C2-181a-SP载体可以显著抑制外源性miR-181amimics的活性(P<0.05)。Western blot结果显示转染pEGFPC2-181a-SP载体可以改善葡萄糖胺诱导的HepG2胰岛素抵抗细胞模型对胰岛素的应答。结论:miR-181a吸附海绵载体策略可以成功的诱导吸附miR-181a,构建的pEGFP-C2-181a-SP载体基因显著增加HepG2细胞的胰岛素敏感性,为改善miR-181a导致的肝细胞胰岛素抵抗提供了潜在的解决方案,有可能成为2型糖尿病治疗的新策略。