弓形虫DNA的提纯及其性质的研究

为建立提取弓形虫DNA的简便方法,我们于1989～1990年进行了本项研究。(一)材料和方法1.虫株:弓形虫(Toxoplasma gondii)ZA株,从浙江病猪体分离所得,由本所传代保存。2.弓形虫滋养体的纯化:取含滋养体的小鼠腹腔液,离心沉淀,经PBS洗涤2～3次后,加30～40倍体积的0.25％胰蛋白酶磷酸盐缓冲液,37℃水浴中消化20分钟;再用PBS离心洗涤4～5次,以除去胰蛋白酶液。最后在沉淀物中加少量PBS稀释,取少许涂片镜检纯化效果。3.弓形虫DNA的提取:将纯化的弓形虫滋养体悬液稀释至一定密度(OD值约为2.0)后,加入SDS使成2％终末浓度,混匀,置40℃水浴中作用1小时,充分裂解虫体。按Myers,W.T.等(1980)