人白介素-12在毕赤酵母中的表达、纯化与活性测定

人IL^(-1)2是目前发现的白细胞介素中对人体免疫活性细胞诱导和调节作用最强和范围最广的一种。具有广阔的应用前景。目前,IL^(-1)2的重组表达主要使用高等真核表达系统。我们构建了p PIC9k-p35和p PICZα-p40重组质粒,共转化毕赤酵母KM71菌株,获得可以同时表达IL^(-1)2双亚基的稳定表达株,通过离子交换亲和层析、疏水亲和层析进行纯化,获得的rh IL^(-1)2样品纯度大于97%,总得率大于60%,降低了工艺难度,有利于进一步大规模制备工作的开展。此外,本研究才用的纯化工艺获得的纯化样品纯度>97%,得率>60%,经PBMC细胞法测定,比活性达到1.36×10~7IU·mg^(-1),与商品化的rh IL^(-1)2标准品相当,为规模化制备和进一步研究应用提供了坚实的基础。