nis Ⅰ基因克隆和强化表达及其发酵条件的优化

nisⅠ基因能提高乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)产nisin的效价。本文自行设计引物,从乳酸乳球菌克隆获得了nisⅠ基因,构建了重组质粒p MG36e-nisⅠ并电转化至乳酸乳球菌中,经筛选得到1株阳性转化子。考查了基因工程菌及原始菌株在不同时期nisⅠ基因的表达量,结果表明,重组菌在6、9、12 h的表达量比原始菌株分别提高了0.44、1.53、2.28倍。在摇瓶培养条件下,通过单因素研究和响应面法优化了重组菌的发酵培养基和培养条件,优化结果为:蔗糖26.7 g·L-1、蛋白胨22.68 g·L-1、酵母粉7 g·L-1、牛肉膏7 g·L-1、Na2HPO421.8 g·L-1、Mg SO40.2 g·L-1,最适p H值7.5,最佳接种量3%,发酵时间12 h,在该条件下,重组菌的nisin发酵水平比原始菌株提高了75.42%。因此,在乳酸乳球菌中强化nisⅠ基因的表达是有效的。